Home
Home
Forums
Forums
Downloads
Downloads
Account
Account
Aquatic Gardeners Association
Main Menu   
 
HomeHome  
    Home
Community  
    Forums
    FAQ
    Content
    Gallery
    Reviews
    Surveys
    Topics
Members  
    Private Messages
    Your Account
    Profile
    Members List
Statistics  
    Statistics
Files & Links  
    Downloads
    Web Links
News  
    News
    Submit News
Other  
    Advertising
    Shout Box
    Site Map
    Recommend Us
    Feedback
    Legal Notices


User Info   
 
Good afternoon 
Anonymous



Register
Lost Password
Username
Password

 Online:   
Member(s):

Guest(s):
01. Guest
02. Guest
03. Guest
04. Guest
05. Guest
06. Guest
07. Guest
08. Guest
09. Guest
10. Guest
11. Guest
12. Guest
13. Guest
14. Guest
15. Guest
16. Guest
17. Guest
18. Guest
19. Guest
20. Guest
21. Guest
22. Guest
23. Guest
24. Guest
25. Guest
26. Guest
27. Guest
28. Guest
29. Guest
30. Guest
31. Guest
32. Guest
33. Guest
34. Guest
35. Guest
36. Guest
37. Guest
38. Guest
39. Guest
40. Guest
41. Guest
42. Guest
43. Guest
44. Guest
45. Guest
46. Guest
47. Guest
48. Guest
49. Guest
50. Guest
51. Guest
52. Guest
53. Guest
54. Guest
55. Guest
56. Guest
57. Guest
58. Guest
59. Guest
60. Guest
61. Guest
62. Guest
63. Guest
64. Guest
65. Guest
66. Guest
67. Guest
68. Guest
69. Guest
70. Guest
71. Guest
72. Guest
73. Guest
74. Guest
75. Guest
76. Guest
77. Guest
78. Guest
79. Guest
80. Guest
81. Guest
82. Guest
83. Guest
84. Guest
85. Guest
86. Guest
87. Guest
88. Guest
89. Guest
90. Guest
91. Guest
92. Guest
93. Guest
94. Guest
95. Guest
96. Guest
97. Guest
98. Guest
99. Guest
100. Guest
101. Guest
102. Guest
103. Guest
104. Guest
105. Guest
106. Guest
107. Guest
108. Guest
109. Guest
110. Guest
111. Guest
112. Guest
113. Guest
114. Guest
115. Guest
116. Guest
117. Guest
118. Guest
119. Guest
120. Guest
121. Guest
122. Guest
123. Guest
124. Guest
125. Guest
126. Guest
127. Guest
128. Guest
129. Guest
130. Guest
131. Guest
132. Guest
133. Guest
134. Guest
135. Guest
136. Guest
137. Guest
138. Guest
139. Guest
140. Guest
141. Guest
142. Guest
143. Guest
144. Guest
145. Guest
146. Guest
147. Guest
148. Guest
149. Guest
150. Guest
151. Guest
152. Guest
153. Guest
154. Guest
155. Guest
156. Guest
157. Guest
158. Guest
159. Guest
160. Guest
161. Guest
162. Guest
163. Guest
164. Guest
165. Guest
166. Guest
167. Guest
168. Guest
169. Guest
170. Guest
171. Guest
172. Guest
173. Guest
174. Guest
175. Guest
176. Guest
177. Guest
178. Guest
179. Guest
180. Guest
181. Guest
182. Guest
183. Guest
184. Guest
185. Guest
186. Guest
187. Guest
188. Guest
189. Guest
190. Guest
191. Guest
192. Guest
193. Guest
194. Guest
195. Guest
196. Guest
197. Guest
198. Guest
199. Guest
200. Guest
201. Guest
202. Guest
203. Guest
204. Guest
205. Guest
206. Guest
207. Guest
208. Guest
209. Guest
210. Guest
211. Guest
212. Guest
213. Guest
214. Guest
215. Guest
216. Guest
217. Guest
218. Guest
219. Guest
220. Guest
221. Guest
222. Guest
223. Guest
224. Guest
225. Guest
226. Guest
227. Guest
228. Guest
229. Guest
230. Guest
231. Guest
232. Guest
233. Guest
234. Guest
235. Guest
236. Guest
237. Guest
238. Guest
239. Guest
240. Guest
241. Guest
242. Guest
243. Guest
244. Guest
245. Guest
246. Guest
247. Guest
248. Guest
249. Guest
250. Guest
251. Guest
252. Guest
253. Guest
254. Guest
255. Guest
256. Guest
257. Guest
258. Guest
259. Guest
260. Guest
261. Guest
262. Guest
263. Guest
264. Guest
265. Guest
266. Guest
267. Guest
268. Guest
269. Guest
270. Guest
271. Guest
272. Guest
273. Guest
274. Guest
275. Guest
276. Guest
277. Guest
278. Guest
279. Guest
280. Guest
281. Guest
282. Guest
283. Guest
284. Guest
285. Guest
286. Guest
287. Guest
288. Guest
289. Guest
290. Guest
291. Guest
292. Guest
293. Guest
294. Guest
295. Guest
296. Guest
297. Guest
298. Guest
299. Guest
300. Guest
301. Guest
302. Guest
303. Guest
304. Guest
305. Guest
306. Guest
307. Guest
308. Guest
309. Guest
310. Guest
311. Guest
312. Guest
313. Guest
314. Guest
315. Guest
316. Guest
317. Guest
318. Guest
319. Guest
320. Guest
321. Guest
322. Guest
323. Guest
324. Guest
325. Guest
326. Guest
327. Guest
328. Guest
329. Guest
330. Guest
331. Guest
332. Guest
333. Guest
334. Guest
335. Guest
336. Guest
337. Guest
338. Guest
339. Guest
340. Guest
341. Guest
342. Guest
343. Guest
344. Guest
345. Guest
346. Guest
347. Guest
348. Guest
349. Guest
350. Guest
351. Guest
352. Guest
353. Guest
354. Guest
355. Guest
356. Guest
357. Guest
358. Guest
359. Guest
360. Guest
361. Guest
362. Guest
363. Guest
364. Guest
365. Guest
366. Guest
367. Guest
368. Guest
369. Guest
370. Guest
371. Guest
372. Guest
373. Guest
374. Guest
375. Guest
376. Guest
377. Guest
378. Guest
379. Guest
380. Guest
381. Guest
382. Guest
383. Guest
384. Guest
385. Guest
386. Guest
387. Guest
388. Guest
389. Guest
390. Guest
391. Guest
392. Guest
393. Guest
394. Guest
395. Guest
396. Guest
397. Guest
398. Guest
399. Guest
400. Guest
401. Guest
402. Guest
403. Guest
404. Guest
405. Guest
406. Guest
407. Guest
408. Guest
409. Guest
410. Guest
411. Guest
412. Guest
413. Guest
414. Guest
415. Guest
416. Guest
417. Guest
418. Guest
419. Guest
420. Guest
421. Guest
422. Guest
423. Guest
424. Guest
425. Guest
426. Guest
427. Guest
428. Guest
429. Guest
430. Guest
431. Guest
432. Guest
433. Guest
434. Guest
435. Guest
436. Guest
437. Guest
438. Guest
439. Guest
440. Guest
441. Guest
442. Guest
443. Guest
444. Guest
445. Guest
446. Guest
447. Guest
448. Guest
449. Guest
450. Guest
451. Guest
452. Guest
453. Guest
454. Guest
455. Guest
456. Guest
457. Guest
458. Guest
459. Guest
460. Guest
461. Guest
462. Guest
463. Guest
464. Guest
465. Guest
466. Guest
467. Guest
468. Guest
469. Guest
470. Guest
471. Guest
472. Guest
473. Guest
474. Guest
475. Guest
476. Guest
477. Guest
478. Guest
479. Guest
480. Guest
481. Guest
482. Guest
483. Guest
484. Guest
485. Guest
486. Guest
487. Guest
488. Guest
489. Guest
490. Guest
491. Guest
492. Guest
493. Guest
494. Guest
495. Guest
496. Guest
497. Guest
498. Guest
499. Guest
500. Guest
501. Guest
502. Guest
503. Guest
504. Guest
505. Guest
506. Guest
507. Guest
508. Guest
509. Guest
510. Guest
511. Guest
512. Guest
513. Guest
514. Guest
515. Guest
516. Guest
517. Guest
518. Guest
519. Guest
520. Guest
521. Guest
522. Guest
523. Guest
524. Guest
525. Guest
526. Guest
527. Guest
528. Guest
529. Guest
530. Guest
531. Guest
532. Guest
533. Guest
534. Guest
535. Guest
536. Guest
537. Guest
538. Guest
539. Guest
540. Guest
541. Guest
542. Guest
543. Guest
544. Guest
545. Guest
546. Guest
547. Guest
548. Guest
549. Guest
550. Guest
551. Guest
552. Guest
553. Guest
554. Guest
555. Guest
556. Guest
557. Guest
558. Guest
559. Guest
560. Guest
561. Guest
562. Guest
563. Guest
564. Guest
565. Guest
566. Guest
567. Guest
568. Guest
569. Guest
570. Guest
571. Guest
572. Guest
573. Guest
574. Guest
575. Guest
576. Guest
577. Guest
578. Guest
579. Guest
580. Guest
581. Guest
582. Guest
583. Guest
584. Guest
585. Guest
586. Guest
587. Guest
588. Guest
589. Guest
590. Guest
591. Guest
592. Guest

Most Ever Online:   
 Guest(s): 1,006
 Member(s): 0
 Total: 1,006

Forums Forums:   
 Posts: 340,131
 Topics: 30,836




http://indianaquariumhobbyist.com/community/ :: View topic - Aquatic Plants Tissue Culture
Forum Index  |  Search  |  Usergroups  |  Edit your profile  |  Members  |  Log in to check your private messages
Ranks  |  Staff  |  Statistics  |  Board Rules  |  Forum FAQ  |  Log in



Aquatic Plants Tissue Culture
Goto page : Previous  1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10  Next
 
Post new topic   Reply to topic   printer-friendly view    http://indianaquariumhobbyist.com/community/ Forum Index -> Aquatic Plants and Planted Aquaria
View previous topic :: View next topic  
Author Message
Madan
Admin
Admin



Joined: Jun 29, 2003
Posts: 7087
Location: Bengaluru, India

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 1:21 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Hi  Madan,
 
 Its  good  to  know  that  you  are  starting  with  tissue  culture  of  aquatic  plants.  I  am  sure  its  a  wonderful  initiative  you  have  undertaken  and  I  am  sure  you  will  succeed.  
 I  wish  I  could  be  in  Bangalore  to  join  you.
 
 A  little  more  about  me:   I  am  a  Biotechnologist  by  profession  and  have  hands-on  experience  in  Tissue  Culture  (both  plant  and  animal)  
 and  my  Masters  thesis  involved  extensive  Microbiology.  Besides  my  curriculum  (  I  hold  a  B.tech  and  M.tech  in  Biotech),  
 I  have  also  been  trained  at  Institute  of  Himalayan  Bioresource  Technology  (CSIR)  in  tissue  culture.  I  have  been  a  not-so-regular  member  of  this  forum  for  
 the  last  few  years  -  my  research  leaves  me  little  time  for  posting  on  forums,  I  hope  you  can  understand,  though  I  do  follow  the  forum  regularly  and  read  as  many  posts  as  I  can.
 As  far  as  the  hobby  is  concerned,  I  have  kept  different  types  of  fish,  snails,  inverts,  and  FW  critters  of  all  sorts  since  childhood.  
 Started  with  plants  and  moss  in  a  7G  Nano  two  years  back.  Time  has  been  the  only  limiting  factor  for  my  devotion  to  the  hobby.
 
 Anyways,  I  wish  you  all  the  best  in  your  endeavor.   The  motive  for  writing  this  message  to  you  is  -  if  you  need  any  kind  of  help  please  feel  free  to  contact  me.  
 Besides  my  experience,  I  have  access  to  labware,  chemical  suppliers  and  lot  of  technical  literature.  
 Had  I  been  there  in  Bangalore,  I  would  have  loved  to  join  you.  But  the  least  I  can  do  for  you,  sitting  in  Delhi  is,   supply  you  with   as  much  info,  tips,  
 troubleshooting  or  any  kind  of  information  you  need.  
 The  only  reason  I  did  not  post  this  in  public  forum  is  because  I  may  not  be  able  to  keep  too  regular  with  this  post  and  sending  replies  to  everyone.  
 With  all  your  experience  and  devotion  to  this  hobby  and  IAH,  you  the  right  person  to  pass  on  all  the  info  to  others.
 I  am  not  so  regular  with  the  forum  so  kindly  contact  me  via  mail  -  djmankotia  [at]  gmail  [dot]  com.  I  will  try  to  respond  as  early  as  I  can.
 
 Best  of  luck!
 
 Regards,
 Dhananjay  Singh
 
 *************************************************************
 
 From  Dhananjay  Singh  Mankhotia,
 
 Hello  Mr.  Madan,
 
 Good  to  hear  from  you.  At  the  outset,  I  would  recommend  that  you  get  in  touch  with  a  lab  supplies  store/dealer  because  
 they  would  have  all  the  equipment/reagents/chemicals  you  would  need  for  the  tissue  
 culture.  For  reagents  and  chemicals,  I  can  recommend  some  manufacturers  of  Lab  grade  materials  -  Qualigens  
 (Owned  by  Thermo-Fisher  Scientific),  SRL,  Mumbai,  HIMEDIA,  etc.
 
 
 To  maintain  sterility,  there  are  two  main  aspects  during  Tissue  culture:
 
 1.  All  work  is  done  under  aseptic  conditions.  In  laboratory  we  use  an  aseptic  chamber  which  has  a  flow  of  laminar  air  to  avoid  
 outside  air  to  come  in  contact  with  the  culture  material.  The  insides  of  this  chamber  are  wiped  with  spirit/70%  ethanol  in  water,  
 Followed  by  UV  light  treatment  of  the  entire  chamber.  All  equipment  are  sterilized  by  autoclaving  -  instead  you  can  dip  the  steel-ware  like  forceps,  
 Needles,  etc   in  spirit  and  lightly  run  over  the  flame  of  a  lamp  to  remove  contaminants.  To  mimic  a  sterile  chamber,  you  can  light  3-4  spirit  lamps
 (you  can  DIY  the  lamps  or  procure  them  from  lab  supply  store  but  make  sure  the  fuel  is  efficient,  leaves  no/less  carbon  residue)  and  try  and  work  within  this  area.  
 Due  to  flame,  the  area  will  be  devoid  of  contaminants  and  will  give  you  a  temporary  small  sterile  zone.
 
 
 2.  The  next  aspect  in  tissue  culture  is  surface  sterilization  of  the  explant  (starting  plant  material).  In  earlier  days  HgCl2  was  used  
 but  now  is  more  or  less  replaced  by  other,  more  environmentally  acceptable  agents  like  Hypo  or  7%  chlorox  solution.  
 After  treatment  with  surface  sterilizer,  washing  is  done  in  sufficient  amounts  of  sterile  water  (you  can  use  thoroughly  boiled  water  here).  
 The  explant  is  then  blotted  onto  a  piece  of  sterile  paper  to  remove  excess  water.  Following  this,  the  explant  is  placed  in  the  culture  media  with  a  sterile  forcep.  
 
 The  culture  media  most  commonly  used  in  laboratory  -  MS  Media  -  Murashige  and  Skoog  media  HAS  NO  ANTIBIOTIC/BIOCIDAL  agent   added  to  it.  
 You  can  check  the  composition  online  or  contact  me  for  details.  
 It  just  has  minimal  salts  (both  Macro  and  micro,  and  Fe-stock  -  similar  to  the  fert  regime  we  follow  for  dosing  in  aquariums,  plus  a  gelling  agent  (agar-agar),  and  also  some  phytohormones).  
 I  repeat,  the  plant  tissue  culture  is  based  on  use  of  sterile  explant  in  the  beginning  itself  and  not  on  the  addition  of  any  biocidal  agents  -  at  least  not  for  routine  purposes.  
 Such  biocidals  are  non-selective  and  may  affect  the  growth  of  the  explant  as  well  as  composition  of  the  media.  
 There  are  other  specific  media  available  that  contain  antibiotics  for  selection  but  these  are  not  used  for  routine  purposes  IMO.  
 They  are  used  for  genetically  engineered  plant  material  where  the  antibiotic  resistance  has  been  incorporated  into  the  plant  material  through  genetic  manipulation.  
 This  not  the  usual  approach  especially  where  the  explant  has  been  taken  from  Nature.
 
 
 Now  a  question  may  arise  in  your  mind  that  what  if  contamination  does  enter  the  growth  chamber  (in  your  case,  the  bottle).  Actually,  no  matter  how  much  precaution  you  take,  
 some  contamination  always  gets  in  (Even  if  some  biocide/antibiotic  has  been  added  because  even  these  chemicals  have  a  restricted  shelf  life  at  room  temperature).  
 Hence  the  tissue  culture  approach  is  based  on  repeated  sub-culturing  -  that  is  every  few  days,  the  explant  is  changed  to  a  fresh  media.  
 Another  reason  why  this  is  necessary  is  because  the  media  also  loses  its  nutritive  power  after  some  days.  Tissue  culture  is  always  performed  in  bulk.
 To  get  one  callus  (I  shall  explain  below),  one  starts  with  around  50-100  bottles/cultures.  Many  are  lost  during  sub-culturing  and  due  to  contamination.
 However,  out  of  these  100  or  so  cultures,  even  if  one  survives  and  forms  a  callus,  we  can  get  several  thousand  identical  plantlets  from  a  single  callus.  
 That  is  why  tissue  culture  is  such  a  versatile  technique.
 
 Callus  is  a  mass  of  unorganized  dividing  cells  -  from  one  callus,  you  can  get  several  explants.  
 From  here,  The  formation  of  root/shoot  is  a  process  called  "differentiation"  and  it  is  governed  by  what  
 phytohormone  you  add  in  the  media.  This  is  where  the  sub-culturing  step  also  comes  in  handy.  
 In  labs,  we  first  grow  the  explant  in  rooting  media  (rich  in  auxin)  and  later  for  aerial  shoot  development,  the  
 explant  is  shifted  to  a  shooting  media  (same  media  but  containing  cytokinin  now).  
 
 Now,  THis  is  another  issue  you  guys  need  to  divert  your  attention  to  -  we  do  the  above  steps  because  once  the  roots  
 develop,  enhanced  nutrient  uptake  starts  thanks  to  the  roots.  But  will  this  strategy  work  with  aquatic  plants,  that  you  need  to  figure  out.  
 Also,  what  would  be  the  strategy  for  mosses,  liverworts  and  other  
 lower  plants  where  no  roots  are  present??
 
 
 I  think  before  starting  you  guys  need  to  read  a  lot  and  do  lots  of  pondering  to  do.  If  you  are  willing  I  can  suggest  some  basic  literature  and  protocols.  
 Owing  to  lack  of  equipment/reagents/infrastructure  of  functional  lab,  you  guys  need  to  improvise  (  as  we  say  here  in  North  India  -  "Jugaad")  
 but  its  not  a  difficult  task  we  just  need  to  get-together  and  ponder.  Even  with  all  the  things  available  in  lab,  we  
 researchers,  especially  in  India,  have  to  use  jugaad  for  some  thing  or  the  other  -  its  all  a  part  of  a  researcher's  life  -  to  improvise!  
 So  am  here  with  you  for  any  troubleshooting.
 
 
 I  am  writing  this  from  my  lab  itself  in  a  jiffy,  I  hope  all  of  the  above  makes  sense.  Else  give  me  some  time,  and  I  will  try  to  come  up  with  something  more  basic  and  comprehensible,  
 easy  for  everyone  to  understand.  If  there  is  anything  in  the  above  text  that  you  may  not  understand  or  need  clarifications  (which  I  am  sure  you  would  -  a  lot!)  please  feel  free  to  contact  me!
 
 
 Regards,
 DJ
Back to top
View user's profile Send private message
Ravabi
Frequent Visitor to IAH
Frequent Visitor to IAH



Joined: Oct 19, 2011
Posts: 229
Location: Xizhi Distrct, New Taipei

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 1:38 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Prabuddha,  Do  remember  that  we  are  doing  it  as  hobbyist  and  with  minimum  budgets.
 
 Getting  autoclavable,  branded   bottles  and  caps  are  expensive.  Laminar  Air  Flow  Chamber  and  bunsen  burners  are  also  out.  Instead  we  are  planning  to  flame  only  the  bottle  mouths  for  a  minute  are  so  using  cooking  LPG  (Nayak  said  he  will  try  it).
 FYI,  Agarose  can  undoubtedly  be  used  for  plant  cell/tissue  culture.  Only  problem  is  it  is  way  too  expensive  as  it  is  an  ultra  purified  version  of  agar-agar  and  is  modified  for  sensing  even  small  amounts  of  impurities  .
Back to top
View user's profile Send private message
PRAVU
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Feb 15, 2010
Posts: 662
Location: Malda, WB

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 1:51 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Yes  that  I  know,  because  of  the  cost  factor  and  it  is  more  purified  than  agar  agar,  we  use  it  in  different  purpose,  not  in  tissue  culture,  I  have  mentioned  it.  We  never  use  agarose  in  cultures  in  labs.  On  case  of  agarose,  its  mess  size  is  important  along  with  gelling  capacity.  And  for  Agar  Agar,  the  only  thing  needed  is  the  anchorage,  for  the  tissue.  But  in  liquid  media  also  PTC  can  be  done,  in  this  way  this  will  be  more  cheaper.  But  for  other  things,  I  haven't  told  to  use  laminar  air  flow,  I  said  if  you  have  access  anywhere,  you  can  use,  but  a  cheaper  method  is  to  use  pressure  cooker.  And  I  dont  think,  the  container  which  can  sustain  pressure  cooker  is  expensive.  You  can  do  one  thing,  just  use  glass  flasks  with  narrow  mouth  (easily  available),  and  tightly  cap  it  with  non-absorbant  cotton  and  then  wrap  it  with  4  folds  of  news  paper  with  a  rubber  band  (all  are  cheap),  put  the  media,  cap  and  wrap  it  and  then  your  are  ready  to  go  with  pressure  cooker.  Is  this  not  a  cheaper  method,  this  way  you  can  prevent  contamination,  which  is  very  problematic  in  PTC.  I  have  personal  experiences.  Anyways,  good  luck.  
 Sorry  if  I  have  mentioned  anything  wrong  which  don't  satisfy  the  goal  of  the  venture.  
 Thanks.
Back to top
View user's profile Send private message Send e-mail
PRAVU
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Feb 15, 2010
Posts: 662
Location: Malda, WB

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 1:57 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Actually,  microwave  oven  is  not  going  to  do  good  for  the  sterilization  as  it  only  heat  the  media,  for  sterilzation,  you  need  atleast  15  lb/  inch2  pressure  with  121  C  temp,  which  is  done  in  autoclave.  But  pressure  cooker  is  also  a  good  option  as  that  will  also  provide  kind  of  same  parameters.  And  for  the  spirit  lamp,  you  just  heat  the  neck  of  the  vials  as  I  have  mentioned  before  inoculating,  and  close  the  neck  with  non-absorbant  cotton  as  I  mentioned  tightly.  (So  tight,  so  that  it  sounds  while  removing).  I  regularly  do  all  these  in  my  lab.
 Thanks.
Back to top
View user's profile Send private message Send e-mail
Madan
Admin
Admin



Joined: Jun 29, 2003
Posts: 7087
Location: Bengaluru, India

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 2:03 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Prabuddha,  Will  look  at  the  cotton  wool  option  too.  Everybody  associated  with  a  lab  advocates  it.
 I  went  by  -  This  Link
 
   one  more
 
 Specifically  about  Aquatic  Plants
 
 Your  analysis  of  what's  there  in  the  links  will  help  refine  what  we  are  trying.  
 Please  comment.
Back to top
View user's profile Send private message
PRAVU
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Feb 15, 2010
Posts: 662
Location: Malda, WB

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 2:12 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Give  me  some  time  sir  ji,  I  will  go  through  these  and  will  revert  back  soon.  Apparently,  the  ideas  they  gave  are  pretty  good.  I  will  try  to  put  some  diagramatic  figures  of  my  own,  that  may  help.
 Thanks.
Back to top
View user's profile Send private message Send e-mail
Madan
Admin
Admin



Joined: Jun 29, 2003
Posts: 7087
Location: Bengaluru, India

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 2:13 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Thank  you,  will  wait  for  your  reply.
Back to top
View user's profile Send private message
rasikanayak
Moderator
Moderator



Joined: Jan 25, 2005
Posts: 2922
Location: Bangalore

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 6:27 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 As  mentioned  earlier,  had  a  very  wonderful,  fun  filled,  learning  experience.  We  are  well  aware  we  might  fail.  And  Madan  and  Ravi  did  warn  us  that  even  if  we  succeed  in  one  Tissue  culture  bottle  from  this  batch,  we  would  be  very  lucky.   Very  lucky  indeed.
 
 We  are  not  worried.  As  Madan  put  it,"We  have  got  the  process  right".  With  all  the  inputs  we  are  getting  from  Prabuddha,  Dhananjay  Singh  and  other  knowledgeable  members  we  will  definitely  improve,  improvise  and  do  a  much  better  job.
 
             
Link

 
 Regards,
Back to top
View user's profile Send private message
menonabhishek
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Mar 01, 2012
Posts: 317
Location: HRBR, Bangalore

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 8:48 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 i  missed  it  Sad  It  looked  like  fun.
Back to top
View user's profile Send private message
random2
Moderator
Moderator



Joined: Jun 23, 2008
Posts: 1212
Location: 12° 18' 26” N 76° 38' 59'' E

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 10:18 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

                                                   
Madan  wrote  (View  Post):                
The  idea  is  to  share  knowledge.  Especially  failures,  and  what  went  wrong,  so  people  can  learn.
 Have  fun  !                

 
 This  is  why  I  love  this  forum.
 
 I  can  say  that  whatever  success  I  have  had  is  because  of  experience  shared  by  people  here.  I  can  say  that  I  have  learnt  from  others  mistakes.
 
 Nayak  &  Vimal,
 
 Great  effort  in  getting  things  documented.
 
 As  said,  its  just  the  beginning.  Once  you  guys  get  this  right,  this  is  going  to  be  very  useful  in  propagating  native  and  exotic  hard  to  find  flora.
Back to top
View user's profile Send private message
vidhyasagar99
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Jan 07, 2010
Posts: 525
Location: bengaluru

Status: Offline
PostPosted: Mon Aug 06, 2012 11:36 pm Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 u  guys  rock,  its  so  exciting  to  see  ,  but  great  information,thank  u  all  ,  i  missed  it  a  lot,  my  work   schedule  is  screwing  me  up,best  of  luck  :thumb:
 
 but  will  try  to  give  u  guys  emmeresed  anubias  flowers
Back to top
View user's profile Send private message
PRAVU
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Feb 15, 2010
Posts: 662
Location: Malda, WB

Status: Offline
PostPosted: Tue Aug 07, 2012 2:18 am Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 The  first  link  is  a  very  good  one,  you  can  follow  that.  IMO,  use  pressure  cooker,  other  things  are  ok.  
 Now  check  for  any  contamination  in  your  current  vials,  if  its  not  working,  then  go  for  the  first  link.  very  well  demonstrated.  
 Only  green  house  is  not  needed  I  think.  MS  media  is  very  widely  used  medium.  a  conical  flask  is  a  good  choice  with  cotton  plug,  
 but  the  mouth  of  the  bottle  should  be  such  wide,  so  that  you  can  put  your  explants.  The  knife,  forceps  etc  can  be  sterilized  by  flaming  in  the  lamp  before  use,  
 but  better  if  wrapped  in  aluminium  foil  and  kept  in  pressure  cooker  for  15-20  min.  Over  all  the  information  in  the  link  are  very  good.  
 Preparation  of  media  and  pH  checking  is  readily  available  in  the  net.  Just  make  sure  you  heat  the  neck  in  the  flame  before  putting  the  plant  parts.
   It  should  also  be  done  in  front  of  the  spirit  lamp  to  avoid  contamination.  After  putting  the  plant  parts,  flame  the  neck  again  and  put  cotton  plug  tightly.  
 These  are  all  the  small  things  you  should  remember  to  avoid  contamination,  but  all  the  things  have  to  be  standerdized.
 you  will  be  able  to  figure  out  the  problems,  of  your  own.  And  better  to  keep  the  cultures  at  25  C.  All  the  chemicals  you  will  get  in  Himedia  laboratories.  
 At  first  you  should  develop  roots,  then  shoots.  for  doing  that,  you  have  to  use  different  hormones  (available  in  the  link),  if  you  are  doing  the  culture  from  the  seeds.  
 If  you  are  using  cut  leves,  you  have  to  go  for  callus  culture.  For  that  too  you  have  to  use  hormones.
 After  you  get  the  callus,  cut  the  upper  surface  in  front  of  the  lamp,  surface  sterilize  if  needed,  
 otherwise  directly  put  it  in  fresh  medium  for  root  development,  after  root  go  for  fresh  media  and  put  hormone  for  shoot  development.....
 Whatever  you  do,  remember  tht  after  a  certain  time  period,  you  have  to  put  the  developed  plant  part  in  fresh  media  ascetically.  
 And  you  can  try  for  a  semi  liquid  medium  and  little  bit  shaking,  its  a  kind  of  experiments,  it  might  help  in  rapid  growth.
 Any  problem,  please  tell  me,  I  will  try  to  help.  And  follow  the  links,  they  are  good  as  I  have  already  said,  with  some  modifications,
 thanks.
Back to top
View user's profile Send private message Send e-mail
PRAVU
Regular Poster on IAH
Regular Poster on IAH



Joined: Feb 15, 2010
Posts: 662
Location: Malda, WB

Status: Offline
PostPosted: Tue Aug 07, 2012 2:39 am Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 http://www.google.co.in/imgres?hl=en&sa=G&biw=1280&bih=681&tbm=isch&tbnid=yMUOC-
 6PZ2dOJM:&imgrefurl=http://users.aber.ac.uk/lum/culture.htm&docid=ckdigPolEmb5hM&imgurl=http://users.aber.ac.uk/lum/somzyg.jpg&w=1275&h=922&ei=PikgUMy4LobkrAfa6IGACQ&zoom=1
 
 http://www.google.co.in/imgres?hl=en&sa=G&biw=1280&bih=681&tbm=isch&tbnid=8Ykqobb_oxvPzM:&imgrefurl=http://mrzacbio.blogspot.com/&docid=memsgX9Uqs_h8M&
 imgurl=http://2.bp.blogspot.com/_vgPvhHSRhhQ/TAoOQAjhOZI/AAAAAAAAAA8/GbL40o34x2E/s1600/plant%252Btissue%252Bculture.jpg&w=1051&h=401
 &ei=PikgUMy4LobkrAfa6IGACQ&zoom=1&iact=hc&vpx=370&vpy=15&dur=479&hovh=138&hovw=364&tx=179&ty=61&sig=115386956136270192477&
 page=1&tbnh=81&tbnw=213&start=0&ndsp=16&ved=1t:429,r:7,s:0,i:95
 
 You  can  also  use  slant  tubes,  I  mean  bigger  test  tubes.  And  instead  of  using  the  filter  in  the  first  link  of  mine,  sterilize  r\everything  as  I  have  mentioned  and  use  cotton  plug  in  place  of  the  filter  on  top  of  conical  flask.
Back to top
View user's profile Send private message Send e-mail
Madan
Admin
Admin



Joined: Jun 29, 2003
Posts: 7087
Location: Bengaluru, India

Status: Offline
PostPosted: Tue Aug 07, 2012 9:05 am Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Pics  From  Vimal  are  here  
 
 http://indianaquariumhobbyist.com/gallery2/v/User_Galleries/imperator/TissueCulture/
Back to top
View user's profile Send private message
Madan
Admin
Admin



Joined: Jun 29, 2003
Posts: 7087
Location: Bengaluru, India

Status: Offline
PostPosted: Tue Aug 07, 2012 9:08 am Post subject: Re: Aquatic Plants Tissue Culture Reply with quote

 Flame  Sterilisation
 
Back to top
View user's profile Send private message
Display posts from previous:
Post new topic  Reply to topic   printer-friendly view http://indianaquariumhobbyist.com/community/ Forum Index ->  Aquatic Plants and Planted Aquaria All times are UTC + 5.5 Hours
Goto page : Previous  1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10  Next
Page 7 of 10

 
Jump to:  
You cannot post new topics in this forum
You cannot reply to topics in this forum
You cannot edit your posts in this forum
You cannot delete your posts in this forum
You cannot vote in polls in this forum
You cannot attach files in this forum
You cannot download files in this forum




Powered By: phpBB © 2001 - 2006 phpBB Group
Nuke-Evo Conversion By: Evo-Themez | iCGstation v1.0 Template By Ray


[News Feed] [Forums Feed] [Downloads Feed] [Web Links Feed] [Validate robots.txt]


Forum Modification Pack by Revolution-Mods.

PHP-Nuke Copyright © 2006 by Francisco Burzi.
All logos, trademarks and posts in this site are property of their respective owners, all the rest © 2006 by the site owner.
Powered by Nuke-Evolution
[ Page Generation: 6048 Seconds | Memory Usage: 3.35 MB | DB Queries: 121 ]

Do Not Click